端粒酶簡(jiǎn)介

端粒酶是一種RNA依賴性DNA聚合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶，由RNA和蛋白質(zhì)組成，可維持端粒長(zhǎng)度（Greider and Blackburn 1989）。端粒酶以自身RNA為模板，合成端粒DNA，從而使細(xì)胞獲得無(wú)限增殖。其主要由3部分組成，即人端粒酶RNA（humane telomerase RNA component, hTERC）、端粒酶協(xié)同蛋白（humane telomerase associated protein, hTEP1）及端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（humane telomerase reverse transcriptase, hTERT），其中hTERT被認(rèn)為是端粒酶活性表達(dá)的關(guān)鍵組分，hTERT編碼的 mRNA 水平與端粒酶整體活性一致。因此，可以用hTERT亞基的mRNA水平基因表達(dá)量來(lái)衡量端粒酶活性。

端粒酶活性檢測(cè)的主要方案

1. 直接檢測(cè)法（Trap法）基于端粒酶對(duì)端粒酶底物DNA的催化延伸作用，可對(duì)端粒酶進(jìn)行特異性識(shí)別，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)端粒酶活性的檢測(cè)。檢測(cè)端粒酶活性的方法主要有端粒重復(fù)序列擴(kuò)增法（TRAP）、端粒重復(fù)序列延伸法、比色法、熒光法、表面增強(qiáng)拉曼光譜法等。

2.間接檢測(cè)法（熒光定量法）主要是通過(guò)檢測(cè)端粒酶催化亞基hTERT基因的表達(dá)量間接反映端粒酶的活性。hTERT基因表達(dá)量與端粒酶活性極顯著相關(guān)，也同時(shí)都是重要的腫瘤標(biāo)志物。催化亞基hTERT基因表達(dá)量檢測(cè)。

Biowing端粒酶檢測(cè)

本 產(chǎn) 品試劑盒采用雙色熒光qPCR   (TaqMan探針?lè)? 檢測(cè)端粒酶催化亞基TERT基 因和 內(nèi)參基 因 GAPDH 。通過(guò)提取細(xì)胞RNA ，利用特異性逆轉(zhuǎn)錄引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)， 以cDNA為模板在單管中利用 多重?zé)晒舛?/span>PCR進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng) (雙重探針： FAM 、Cy5) 。選用293T細(xì)胞為陽(yáng)性對(duì)照以及MRC- 5細(xì) 胞為陰性對(duì)照，判斷樣本中是否有TERT基因表達(dá) 。該試劑盒具有以下特點(diǎn)：

1 . 靈敏：雙色探針，靈敏度高。                 

2 . 穩(wěn)定：全程閉管操作，無(wú)交叉污染。

3 . 可靠：含內(nèi)參基因，避免假陰性。

4 . 方便：操作簡(jiǎn)單，無(wú)需電泳步驟。

5.  定量： 以CT值判斷，可定量檢測(cè)。

結(jié)果展示

 圖 左: 陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增曲線；右: 陰性對(duì)照的的擴(kuò)增曲線

( 藍(lán)色為TERT基因曲線, 紅色為內(nèi)參基因曲線)